产品货号：
BTN80803
中文名称：
柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)
英文名称：
Animal mitochondrial DNA column extraction kit(PCR Grade)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料，但传统的两步式mtDNA提取方法是先温和裂解细胞，分离线粒体，然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要针对不同组织材料单独进行优化。本试剂盒克服了上述缺点。
储存条件：常温运输，短期可以在室温放置；长期保存最好放4℃。
一、培养细胞预处理
二、组织细胞预处理
三、血液预处理
四、mtDNA提取
相关搜索：柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)，mtDNA提取试剂盒
- 不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。
- 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
- 每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。
- 注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大，非常难提。
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 13mL |
| 溶液B | 13mL |
| 溶液C | 18mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| DNA洗脱液 | 10mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：常温运输，短期可以在室温放置；长期保存最好放4℃。
一、培养细胞预处理
- 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞，离心收集后弃上清。
- 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次，离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二、组织细胞预处理
- 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小最好)，转移到1.5mL塑料离心管中，用于mtDNA提取。注意：最好不要使用冻存的动物组织，因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破，使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解，影响回收率。
三、血液预处理
- 将3～5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟，取白细胞层。
- 用自备PBS洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四、mtDNA提取
- 在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A，充分吹打分散。如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
- 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
- 冰上放置6～8分钟。注意不要超过8分钟。
- 加入350μL冰浴的溶液C，温和混匀4～6次，可见白色沉淀物产生，然后放冰上放置20～25分钟。
- 室温12000～15000g离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。
- 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。
- 室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中的废液。
- 加入500μL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中废液。
注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。 - 重复上步1次。
- 室温12000～15000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
- 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中，加入30～50μL 65～80℃预热的DNA洗脱液，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
- 室温12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即mtDNA。
- 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强，如果再加30～50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于第一次洗脱的20～30%)，但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。
- 12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。
- 由于DNA机械断裂，电泳时DNA可能不呈现专一的带，但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。
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