产品货号:
BTN80803
中文名称:
动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)
英文名称:
Animal mitochondrial DNA column extraction kit(PCR Grade)
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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动物线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料,但传统的两步式动物mtDNA提取方法需要先温和裂解动物细胞,分离线粒体,然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制,需要针对不同组织材料单独进行优化,因此纯化效果差异很大。
- 不需要单独纯化线粒体,操作简单快捷。
- 得到的动物mtDNA只能用于PCR分析,不能用于其它实验。
- 可以用于培养的动物细胞,实体动物组织和血液。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克实体动物组织一般能得到1~2μg mtDNA。
- 本制品不能用于纯化植物线粒体DNA(需要另购)。
- 本试剂盒足够50次微量提取。
- 本制品只可用于科研。
组分 | 规格 |
动物线粒体DNA纯化溶液A | 13mL |
动物线粒体DNA纯化溶液B | 13mL |
动物线粒体DNA纯化溶液C | 18mL |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50mL |
DNA洗脱液 | 10mL |
保存:室温,有效期1年。
待处理样品,0.25%胰酶消化液,PBS缓冲液,1.5mL塑料离心管
一、培养细胞的预先处理(本试剂盒不含相关试剂)
- 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养的动物细胞,离心收集后弃上清,保留细胞沉淀。
- 用PBS缓冲液洗涤细胞沉淀两次,最后得到的细胞沉淀将直接用作动物mtDNA提取的材料。
二、动物组织细胞预处理(本试剂盒不含相关试剂)
- 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小最好),转移到1.5mL塑料离心管中,直接用作动物mtDNA提取的材料。
- 不能使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体膜和细胞膜刺破,其DNA已经释放出来,被体液中的DNA酶降解。
三、血液预处理
- 将3~5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。
- 用自备PBS缓冲液洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四、线粒体粗提物制备
- 用自选方法将10E7个培养细胞或1g实体组织匀浆。
- 室温700×g离心6分钟,收集上清。
- 将上清在室温10000×g离心10分钟,得线粒体粗提物沉淀。
五、mtDNA提取
- 在细胞沉淀或剪碎的组织或线粒体粗提物沉淀中加入250μL冰浴的动物线粒体DNA纯化溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
- 加入250μL常温的动物线粒体DNA纯化溶液B,轻柔颠倒混匀10次,不要剧烈振荡。
- 如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用。
- 冰上放置6~8分钟。
- 注意不要超过8分钟。
- 加入350μL冰浴的动物线粒体DNA纯化溶液C,轻柔颠倒混匀6次,可见白色沉淀物产生。冰上放置20分钟。
- 室温13000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。
- 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。
- 室温13000g离心1分钟,弃收集管中的废液。
- 加入500μL的通用洗柱液,室温13000g离心1分钟,弃收集管中废液。
- 重复上步1次。
- 室温13000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留通用洗柱液会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
- 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入50μL DNA洗脱液,室温放置2分钟。
- 室温13000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克实体动物组织一般能得到3~5μg的mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。本试剂盒得到的mtDNA一般有断裂,电泳时不呈现专一的带,但不影响作为PCR模板。
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